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              分光光度計測定食品中原花青素含量

              日期:2021-08-11 13:28:00 作者:admin

                關鍵字:分光光度計;原花青素      鏈接:http://www.ourfountain.com/article-46.html
                一、范圍
                本方法規定了保健食品中原花青素的測定方法。
                本方法適用于保健食品中原花青素的含量測定。
                二、原理
                原花青素是含有兒茶素和表兒茶素單元的聚合物。原花青素本身無色,但經過熱酸處理后,可以生成深紅色的花青素離子。本法用分光光度計測定原花青素在水解過程中生成的花青素離子。計算試樣中原花青素含量。
                三、試劑和材料
                注:除非另有說明,本方法所用試劑均為分析純,水為 GB/T6682 規定的一級水。
                1 試劑
                1.1 甲醇(CH3OH)。
                1.2 正丁醇(CH3(CH2)3OH)。
                1.3 鹽酸(HCl)。
                1.4 硫酸鐵銨(NH4Fe(SO4)2·12H2O)
                2 試劑配制
                2.1鹽酸(2 mol/L):取鹽酸90mL,加水適量使成500mL,搖勻。
                2.2 硫酸鐵銨溶液:稱取10g硫酸鐵銨,用2 mol/L鹽酸溶解并定容至500mL,混勻,此溶液中硫酸鐵銨濃度為2%(w/v)。
                2.3 標準品
                原花青素(葡萄籽來源),純度≥95%。
                2.4 標準品溶液的配制
                原花青素標準儲備液(1.0 mg/mL):稱取10 mg(精確至0.1 mg)原花青素標準品于10 mL 容量瓶中,用甲醇溶解并定容至刻度,搖勻。
                四、儀器
                1 天平:感量為 1 mg 和 0.1 mg。
                2 分光光度計。
                3 離心機:轉速 ≥4000 r/min。
                4 超聲儀。
                5 回流裝置。
                五、分析步驟
                1 試樣制備
                1.1 固體試樣:稱取已粉碎混合均勻的待測試樣50 mg~100 mg(精確至0.1 mg),置于50 mL容量瓶中,加入30 mL甲醇,超聲處理20 min,放冷至室溫后,加甲醇至刻度,搖勻,離心或放置至澄清后取上清液備用。
                1.2 含油試樣:稱取混合均勻的待測試樣50 mg(精確至0.1 mg),置于小燒杯中,用20 ~30mL甲醇分數次攪拌,將提取液轉移至50 mL容量瓶中,直至甲醇提取液無色,加甲醇至刻度,搖勻。
                1.3 液體試樣:吸取不超過1 mL的待測試樣,置于50 mL容量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻。
                2 試樣測定
                將正丁醇與鹽酸按95:5的體積比混合后,取出6.0 mL置于具塞錐形瓶中,再加入0.2 mL硫酸鐵銨溶液和1.0 mL試樣溶液,混勻,置沸水浴回流,精確加熱40 min后,立即置冰水中冷卻,在加熱完畢15 min后,于546 nm波長處測吸光度,由標準曲線計算試樣中原花青素的含量。顯色在1小時內穩定。
                3 標準曲線制備
                分別吸取原花青素標準儲備液0 mL、0.1 mL、0.25 mL、0.5 mL、1.0 mL、1.5 mL置于10 mL容量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻。各吸取1.0 mL測定,與試樣測定方法相同。繪制原花青素濃度與吸光度關系的標準曲線。
                六、分析結果表述
                試樣中原花青素測定結果按(1)式計算
                C×V×1000
                X= ———————————×100………………..(1)
                m×1000×1000
                式中: X—試樣中原花青素的含量, g/100g;
                C—由標準曲線上查出待測試樣中原花青素的濃度,μg/mL;
                V—待測試樣定容總體積, mL;
                m—試樣質量,g。
                計算結果保留三位有效數字。
                七、技術參數
                精密度:在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不超過算術平均值的10%。
                八、其他
                本方法的定量限0.2mg/g。

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